Práctica: Separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel

Los cloroplastos deben su color verde a un pigmento denominado clorofila. Sin embargo, lo que en realidad existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos representados principalmente por dos tipos de clorofila (clorofila a y clorofila b), por β caroteno, xantofila, antocianina... en numerosas ocasiones uno de estos pigmentos es tan abundante que enmascara a los demás y no se pueden observar. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, lo cual permite su separación cuando una solución de la misma asciende por capilaridad por una tira de papel poroso (papel de filtro), ya que las más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste va ascendiendo. De esta forma, al cabo de cierto tiempo, a lo largo del papel de filtro se irán situando los distintos pigmentos en forma de bandas coloreadas, tanto más desplazadas cuanto más solubles sean los pigmentos a que pertenecen y tanto más anchas cuanto mayor sea la abundancia de estos en la mezcla.  
Material: Mortero, papel de filtro, arena de cuarzo, matraz, caja de Petri, embudo de vidrio y embudo de papel, alcohol de 96º, hojas de espinaca, perejil, hierbabuena...
Método:
Extracción de pigmentos: Colocar en un mortero trozos de hojas lavadas (quitando las nerviaciones más gruesas) junto con 50 o 60 cm3 de alcohol de 90º y una cucharadita de arena. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa. Filtrar, recogiendo el filtrado en un matraz. Se obtiene así una solución en alcohol de pigmentos.
Separación de pigmentos:
La solución antes obtenida se vierte sobre una caja de Petri. Se coloca un papel de filtro doblado en ángulo sobre la solución y se deja en reposo el tiempo necesario para que el alcohol y los pigmentos vayan ascendiendo por el papel produciéndose la separación cromatográfica.
Conclusiones:
Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografía de la espinaca, podemos ver cuatro bandas o zonas, que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad, se reconocen estas bandas y en este orden: clorofila b, clorofila a, xantofila y carotenos.